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高效液相色譜儀有什么特點(diǎn) 高效液相色譜儀原理是什么

摘要:1960年代,由于氣相色譜對(duì)高沸點(diǎn)有機(jī)物分析的局限性,為了分離蛋白質(zhì)、核酸等不易氣化的大分子物質(zhì),氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。1960年代末科克蘭(Kirkland)、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人開(kāi)發(fā)了世界上第一臺(tái)高效液相色譜儀,開(kāi)啟了高效液相色譜的時(shí)代。接下來(lái)本文將簡(jiǎn)單介紹高效液相色譜儀有什么特點(diǎn)以及高效液相色譜儀原理是什么,一起到文中來(lái)看看吧!

一、高效液相色譜儀有什么特點(diǎn)

高效液相色譜儀的顯著特征是高壓、高速、高效、高靈敏度、高選擇性和應(yīng)用范圍廣等。

1、高壓

高效液相色譜儀為了獲得高柱效,使用的固定相粒徑很小(<10um),液體流動(dòng)相高速通過(guò)時(shí),產(chǎn)生很高的壓力,工作壓力范圍為1.5×107~3.5×107Pa。

2、高速

由于釆用了高壓,流動(dòng)相流速快,所需的分析時(shí)間比經(jīng)典液相柱色譜儀少得多。

3、高效

高效液相色譜儀的柱效能約3萬(wàn)塔板/米,氣相色譜儀的柱效能約2000塔板/米。

4、高靈敏度

由于采用了高靈敏度的檢測(cè)器,最小檢測(cè)量可達(dá)10-9g,甚至10-11g,而所需樣品量很少。

5、高選擇性

可以通過(guò)控制流動(dòng)相改善分離過(guò)程的選擇性。

6、應(yīng)用范圍廣

高效液相色譜儀可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來(lái)說(shuō),沸點(diǎn)在450℃以下,相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用氣相色譜儀分析,但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%~20%,其余的80%~85%有機(jī)物原則上可采用高效液相色譜儀分析。

二、高效液相色譜儀原理是什么

高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過(guò)檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。

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