一、培養(yǎng)基滅菌的方法有哪些

培養(yǎng)基配制好后，必須立即滅菌，因?yàn)槿绻L時(shí)間不進(jìn)行滅菌，培養(yǎng)料內(nèi)的微生物就會在料內(nèi)發(fā)酵生長，從而破壞培養(yǎng)基內(nèi)的營養(yǎng)成分。一般來說，培養(yǎng)基的滅菌方法主要有以下六種：

1、干熱滅菌

多用于耐熱器皿滅菌，例如移液管和玻璃平皿等、玻璃試管或者金屬器皿等等，可在170攝氏度滅菌2-4h，也可在200所說的滅菌0.5-1h。接種環(huán)，接種針等、涂布棒之類的實(shí)驗(yàn)器材，可用酒精燈直接灼燒滅菌。

滅菌效果：滅菌效果好，能殺死一切微生物，芽孢也不例外。

注意事項(xiàng)：干熱滅菌過程的熱穿透效果差且比較慢，因此在烘箱內(nèi)進(jìn)行干熱滅菌時(shí)，不可擺放過滿；塑料、橡膠等不耐熱材質(zhì)不可采用此方法滅菌；紙、棉的滅菌溫度不能超過170℃。

2、高壓蒸氣滅菌（濕熱滅菌）

通常用于實(shí)驗(yàn)室大部分培養(yǎng)基的滅菌，亦可用在玻璃器皿上、金屬器皿滅菌。通常采用121°C高壓滅菌15-20min或116°C高壓滅菌30min，滅菌參數(shù)可以依據(jù)培養(yǎng)基的不同而調(diào)節(jié)。

滅菌效果：它能殺死一切微生物，芽孢也不例外。

注意事項(xiàng)：滅菌時(shí)冷空氣沒有排出、培養(yǎng)基本身含有過多的芽孢、滅菌方式不當(dāng)、滅菌鍋中的物品放置過滿，均會造成滅菌的失敗；在進(jìn)行容器滅菌時(shí)，容器不可密封，需與滅菌鍋內(nèi)空氣流通。

3、水浴-加熱-流動蒸汽滅菌

常用于含有不耐熱成分培養(yǎng)基的滅菌，如XLD瓊脂等、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液等、亞硫酸鉍瓊脂等等。用流動蒸汽對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，若無對應(yīng)流動蒸汽滅菌設(shè)備，既可用水浴加熱，也可用“蒸”法殺菌。

滅菌效果：能殺死微生物的繁殖體，無法殺死芽孢體，用這種方法殺菌的培養(yǎng)基，一般抑菌性較強(qiáng)，或者需要很短的時(shí)間。

注意事項(xiàng)：不同培養(yǎng)基成分耐熱性有差別，加熱時(shí)應(yīng)注意，如將含有亞硒酸鹽的培養(yǎng)基（SC、SBG等）加熱到90°C左右，過高的加熱可導(dǎo)致亞硒酸氫鈉的分解，培養(yǎng)基變紅色，含有瓊脂的培養(yǎng)基可以加熱沸騰4-6次，也可以沸水浴后20-30min讓瓊脂充分溶解。

4、過濾滅菌

多用于抗生素或含有不耐熱成分的培養(yǎng)基滅菌，通常采用孔徑為0.22μm微孔濾膜或者濾芯過濾除菌。實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)無菌空氣時(shí)亦可使用此法，采用特殊濾芯或者濾網(wǎng)，過濾和除菌空氣。

滅菌效果：能去除常見的細(xì)菌，真菌和芽孢體，卻無法去除支原體，病毒和其他體積微小的生物。

注意事項(xiàng)：使用前通常需按照說明書使濾膜或?yàn)V芯浸濕；需要嚴(yán)格遵守過濾器或者濾膜的指示，速度過快或者過濾體積過大都會造成濾膜的斷裂和除菌的失敗；黏度較大或有沉淀的培養(yǎng)基不適合用此方式除菌。

5、輻照滅菌

微波、紫外線、X射線、γ射線都可以進(jìn)行滅菌。γ射線具有很強(qiáng)的穿透力，滅菌效果良好，在食品中得到了廣泛的應(yīng)用、藥品行業(yè)的產(chǎn)品滅菌，亦多用于微生物培養(yǎng)基中、實(shí)驗(yàn)器材的滅菌。某些特殊培養(yǎng)基或者添加劑成分，由于不宜采用高溫蒸汽滅菌、過濾除菌等等，可用γ射線照射滅菌。紫外線殺菌作用弱，很少有穿透力，一般只適用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣或者物體表面的殺菌。

滅菌效果：γ射線具有良好的滅菌和穿透力，能殺滅一切微生物，芽孢體也不例外。

注意事項(xiàng)：并非所有培養(yǎng)基都可以采用γ射線輻照滅菌方式，一些染料或不穩(wěn)定成分經(jīng)輻照后會發(fā)生變化；γ射線對瓊脂有一定的損傷，所以在固體培養(yǎng)基滅菌的過程中，輻照劑量及瓊脂的加入量均需適當(dāng)調(diào)整；玻璃制品、金屬制品一般不可采用此方法滅菌。

6、化學(xué)試劑滅菌

通常用環(huán)氧乙烷殺菌，及各種消毒劑的浸泡滅菌。環(huán)氧乙烷在平皿中曾經(jīng)得到廣泛應(yīng)用、對一次性醫(yī)療產(chǎn)品進(jìn)行滅菌，卻因環(huán)境污染大，滅過菌后的制品需要較長時(shí)間放置，讓環(huán)氧乙烷散去，目前已逐漸為其他滅菌方式所代替。

滅菌效果：不同消毒劑的殺滅效果是有區(qū)別的，粗略地可以分為低效消毒劑、中，高效消毒劑。環(huán)氧乙烷是一種高效消毒劑，能殺死含有芽孢等一切微生物。

注意事項(xiàng)：此類滅菌方式通常會有殘留，且對環(huán)境有污染，因此一般不適合用于直接進(jìn)行微生物培養(yǎng)相關(guān)器皿滅菌；殺菌能力越強(qiáng)的消毒劑，刺激性、腐蝕性、毒性往往越大，使用時(shí)需注意防護(hù)。

二、培養(yǎng)基滅菌用哪種方法好

培養(yǎng)基的滅菌方法眾多，采用不適當(dāng)?shù)臏缇椒赡軙茐呐囵B(yǎng)基的質(zhì)量，會改變顏色、透明度降低、pH變化等，那么哪種方法比較好呢？

由于不同微生物培養(yǎng)需要的培養(yǎng)基不同，滅菌方法的選擇方面也有所不同，一般來說，培養(yǎng)基的滅菌方法應(yīng)按照說明書或驗(yàn)證試驗(yàn)參數(shù)來采用不同方法，常規(guī)的是采用濕熱滅菌，特殊要求的采用薄膜過濾等。