一、培養(yǎng)基的制備常見問題及原因分析

培養(yǎng)基的配制是微生物實(shí)驗(yàn)人員的基本技能之一，適宜的培養(yǎng)基制備方法、選擇正確的滅菌方式、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證，在制備培養(yǎng)基的過程中，可能會(huì)遇到以下幾種問題：

1、培養(yǎng)基不能凝固

（1）制備過程中過度加熱。

（2）低pH造成培養(yǎng)基酸解。

（3）稱量不正確瓊脂未完全溶解。

（4）培養(yǎng)基成分未充分混勻。

2、pH不正確

（1）制備過程中過度加熱。

（2）水質(zhì)不佳。

（3）外部化學(xué)物質(zhì)污染。

（4）測(cè)定是溫度不正確。

（5）pH計(jì)為正確校準(zhǔn)。

（6）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

3、顏色異常

（1）制備過程過度加熱。

（2）水質(zhì)不佳。

（3）pH不正確。

（4）外來污染。

（5）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

4、產(chǎn)生沉淀

（1）制備過程過度加熱。

（2）水質(zhì)不佳。

（3）pH不正確。

（4）原料中的雜質(zhì)。

（5）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

5、培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/低生長(zhǎng)率

（1）制備過程過度加熱。

（2）水質(zhì)不佳。

（3）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

（4）使用成分不正確，添加劑用量不正確。

（5）容器或水中的有毒殘留物。

6、選擇性差

（1）制備過程過度加熱。

（2）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

（3）配方使用不對(duì)。

（4）添加成分不正確，例如添加成分是培養(yǎng)基過熱、添加濃度錯(cuò)誤等。

7、污染

（1）無菌操作存在問題。

（2）添加劑污染。

（3）不適當(dāng)滅菌

二、制備培養(yǎng)基如何減少失敗率

制備培養(yǎng)基的時(shí)候，因?yàn)椴僮鞑划?dāng)可能會(huì)出現(xiàn)各種問題，導(dǎo)致制備失敗，為了減少失敗率，制備培養(yǎng)基時(shí)要注意：

1、選擇合適的培養(yǎng)基配方

同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的加以選用，記錄其來源。

2、培養(yǎng)基成分的稱取要精確

培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂，最好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方上做出記號(hào)，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。

3、培養(yǎng)基各成分的混合和溶化要注意

培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。最好使用不銹鋼鍋加熱溶化，也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)，以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化。

4、調(diào)整好pH

培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正，因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化，例如，牛肉浸液約可降低pH0.2。而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的最終pH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)正后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。