一、植物蛋白提取工藝流程

1、準(zhǔn)備工作

首先，你需要稱取50-100mg的植物組織，放到一個(gè)1.5mL的離心管里。然后加入200μL的裂解液一，用研磨棒把植物組織磨碎，讓它和裂解液充分混合。接著，把離心管放到冰上，靜置10分鐘。這個(gè)步驟很重要，能讓蛋白更穩(wěn)定。

2、過濾和離心

接下來，把過濾柱放到收集管里，把第一步中的勻漿液倒進(jìn)過濾柱中。然后，用13800g（大約14000rpm）離心5分鐘。你會得到一個(gè)濾液，這個(gè)濾液可以直接用來做SDS-PAGE電泳，不過要注意，因?yàn)樘崛〉牡鞍准兌炔桓撸赡軙艿揭恍┨穷?、色素和無機(jī)鹽的干擾。

3、進(jìn)一步純化

向?yàn)V液中加入等體積的試劑二，漩渦震蕩20秒，再用13800g離心5分鐘。這樣溶液會分層，去掉上層溶液。然后，加入1mL預(yù)冷的試劑三，放到-20℃冰箱里，靜置10-20分鐘。如果植物組織量比較少，可以延長到過夜。接著，用13800g離心10分鐘，棄上清。

4、再次洗滌

再加入500μL預(yù)冷的試劑四，重懸沉淀，用13800g離心5分鐘，棄上清。這個(gè)步驟重復(fù)一次，確保蛋白純度更高。

5、干燥和溶解

室溫開蓋靜置5-10分鐘，讓沉淀風(fēng)干。然后，用合適的緩沖液溶解沉淀，推薦使用Tris-Cl（pH8.8），或者直接用1×SDS-PAGE上樣緩沖液溶解，進(jìn)行電泳測試。

二、植物蛋白提取方法有哪些

在植物組織蛋白質(zhì)提取過程中，常用的提取方法包括研磨-提取法、氯醋酸-丙酮沉淀法及TRIzol法等。

1、研磨-提取法中，首先將樣品置于研缽中用液氮研磨，然后加入提取液并靜置，之后進(jìn)行離心處理。提取液由1M Tris-HCl（pH 8）、甘油、聚乙烯吡咯烷酮組成。此方法特別適用于SDS-PAGE電泳。提取后的上清液可用于進(jìn)一步的蛋白質(zhì)分析。

2、氯醋酸-丙酮沉淀法則適用于植物組織的蛋白質(zhì)提取，尤其適合雙向電泳。該方法包括研磨、加入提取液、離心、丙酮沉淀等步驟。提取液含10%TCA和0.07%β-巰基乙醇的丙酮，裂解液則由尿素、CHAPS、DTT等組成。

3、對于腸黏膜等組織，TRIzol法是一種常用的蛋白質(zhì)提取方法。此方法包括異丙醇沉淀、鹽酸胍/95%乙醇沉淀、乙醇溶解等步驟。在處理過程中，存在沉淀不溶解及SDS結(jié)晶等問題。為解決這些問題，可以使用提蛋白試劑盒，并確保組織碎成適中的大小，立即加入2X BUFFER并煮沸5-10分鐘。

4、在水稻苗、葉鞘、根等植物材料的蛋白質(zhì)提取中，一般采用研磨后加入lysis buffer，離心取上清的方法。lysis buffer主要由尿素、NP-40、AMPHOLINE、2-ME、PVP-40等組成。

5、對于秧苗蛋白質(zhì)樣品的提取，Davermal等（1986）提出的方法較為常用。具體步驟包括剪碎材料，加入PVP-40及石英砂，用液氮研磨，加入三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巰基乙醇），離心棄上清，復(fù)溶于丙酮，再沉淀并復(fù)溶于UKS液，溫育后離心取上清即可上樣電泳。

6、在植物根中蛋白質(zhì)的抽取過程中，主要步驟包括研磨、加入1M KH2PO4 K2HPO4緩沖液、離心、取上層液。此方法適用于植物根中蛋白質(zhì)的提取。

三、植物蛋白提取注意事項(xiàng)

1、盡可能提取完全或降低樣本復(fù)雜度，只集中提取目的蛋白。

2、保持蛋白處于溶解狀態(tài)（通過裂解液的pH鹽濃度，表面活性劑，還原劑等的選擇）。

3、提取過程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修飾等（低溫操作，加入合適的蛋白酶和磷酸酶抑制劑）。

4、盡量除去核酸、多糖、脂類等干擾分子（通過加入核酸酶或采取不同提取策略）。

5、樣品分裝，長期于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。